外泌体提取方法取决于研究的具体目的、来源样本种类以及研究者的实验能力和经验。下面是一些常用的外泌体提取方法及其适用性分析,供参考:
1、差速离心法(Differential centrifugation method)。
原理:利用不同离心速度将细胞碎片和大颗粒物质逐步沉淀,较终分离出直径在30-150 nm之间的外泌体。
优点:简单易行,无需特殊设备。
缺点:提取效率不高,需要多次离心以去除杂质。
适用性:适用于从体液(如血浆、尿液等)中提取外泌体。
2、密度梯度离心法(Density gradient centrifugation)。
原理:通过在密度梯度(如葡萄糖、蔗糖等)上进行离心,使外泌体在不同密度层分离。
优点:提取纯度较高,可分离出不同密度的外泌体亚群。
缺点:操作相对复杂,需要较长的离心时间。
适用性:适用于从细胞培养液或血清等样本中提取外泌体。
3、尺寸排除色谱法(Size exclusion chromatography)。
原理:利用尺寸排除色谱柱分离样品中的分子,将外泌体从大分子组分中分离。
优点:提取纯度较高,可同时分离不同大小的外泌体。
缺点:需要特殊的设备,操作复杂。
适用性:适用于从细胞培养液或血清等样本中提取外泌体。
4、外泌体富集试剂盒(ExoQuick)。
原理:利用一种特殊的聚合物材料,将外泌体富集到一个小体积中。
优点:操作简单快捷,可在不加离心的情况下从体液中提取外泌体。
缺点:提取效率相对较低。
适用性:适用于从体液(如血浆、尿液等)中快速富集外泌体。
选择哪种外泌体提取方法应该结合实验需求和样本特点来确定,以获得较优的结果。
面部填充过多外泌体主要是指填充物(如玻尿酸、***杆菌素等)在注射后,由于过量注射或者错误的注射方法,导致填充物在面部组织中积聚过多而形成的外泌体。为了降解过多的外泌体,可以采取以下措施:
1. 等待自然降解:填充物通常会在注射后逐渐被身体吸收和代谢,一种降解过多外泌体的方法是等待足够的时间让填充物自然降解。具体的时间因填充物类型和注射部位而异,一般而言,玻尿酸填充物可在6-12个月内被降解。
2. 溶解注射:如果外泌体过多且需要快速消除,可考虑进行溶解注射。针对不同类型的填充物,可以选择相应的溶解药物进行注射。针对玻尿酸填充物,透明质酸酶(Hyaluronidase)可以用于溶解剂。注射溶解药物可帮助加快填充物的降解速度。
3. 手术切除:如果面部填充物过多造成了明显的外泌体,且无法通过注射方法降解,可能需要进行手术切除。手术切除通常是由经验充足的整形外科医生进行的,需要根据具体情况选择合适的手术方案。
在进行任何措施之前,应该******的医生,他们会根据具体情况给予较***的建议和处理方式。注射填充物时选择合适的医生和机构,并遵循他们的建议和操作规范,可有效降低填充过多外泌体的风险。
思路迪诊断可谓是国内外泌体临床应用的探路者,早在多年前,就基于对医学的深刻洞察,专门成立了一支由***的技术人才组成的外泌体研究团队。到目前为止,思路迪诊断不光***突破了外泌体提取和纯化的难题,还建立了3套外泌体提取技术:试剂法、磁珠法、流控排阻法,这些研究成果对***的诊断有着重要意义。
在思路迪诊断自主研发的外泌体检测技术和研究平台上,转化医学研究团队与多位临床医生共同展开了一系列***早期诊断生物标志物探索,已在肝癌、肺癌、胰腺癌中取得多次突破,后续还将会进行系列报道包括卵巢癌、尿路上皮癌和肺癌等恶性***早诊的转化研究成果。
原文链接: Huilin Shao, Hyungsoon Im, Cesar M. Castro, Xandra Breakefield, Ralph Weissleder and Hakho Lee. New Technologies for Analysis of Extracellular Vesicles. Chem Rev. 2018 Feb 28;118(4):1917-1950. doi: 10.1021/acs.chemrev.7b00534. 该综述发表在Chemical Reviews杂志上,影响因子高达54.301分,对细胞外囊泡的研究方法总结非常***,基本上目前EVs研究中用到的研究方法,这篇综述都有介绍,十分详尽!通讯作者是哈佛大学的Hakho Lee***。 Extracellular Vesicles (EVs) 细胞外囊泡是由细胞主动释放的多样的纳米级膜囊泡。类似大小的囊泡可根据其生物发生、大小和生物物理性质进一步分类(如外泌体、微囊泡)。虽然EVs较初被认为是细胞碎片,因此未被重视,但现在EVs越来越多地被认为是细胞间通信和疾病诊断和预后的循环生物标志物的重要载体。 该综述的内容包含: 生物流体(Biofluids)中含有大量的EVs,这些EVs可以从Parental Cells转移不同的分子去其他细胞,包括:蛋白,mRNA/miRNA,DNA等。 EV的形成决定了其膜组成。微小囊泡的膜组成较能反映其Parental Cells(母细胞)的质膜。相反,外泌体中已经鉴定出特异性的内体蛋白分子,这反映出外泌体形成的机制。内体分选复合物(ESCRT)已被广泛认为用于调节和引导特定分子进入MVB的腔内囊泡。ESCRT及其四个主要复合物(ESCRT 0,I,II和III)负责传递泛素化蛋白,用于溶酶体降解和蛋白回收。较近的研究表明,特定的ESCRT家族蛋白的耗竭可以改变外泌体的蛋白质含量和细胞释放外泌体的速率。更有趣的是,发现外泌体富含ESCRT系统的成分(例如TSG101和Alix),可用作外泌体识别的标记。ESCRT不是介导外泌体形成的仅有机制。其他不依赖ESCRT的过程似乎也能以相互交织的方式参与其形成和分泌。外泌体也富含ESCRT非依赖性的分子。四跨膜蛋白CD9,CD63和CD81已被证明参与内体小泡运输。小GTP酶的Rab家族参与小泡运输和与质膜融合表明这些蛋白在释放外泌体中的作用。外泌体中神经酰胺水平升高,抑制鞘磷脂会引起的外泌体释放减少,表明鞘磷脂酶与囊泡释放有关。外泌体和微囊泡都包含核酸,包括miRNA,mRNA,DNA和其他非编码RNA。自从较初发现EV含有RNA,人们一直非常关注EV RNA用作诊断生物标志物。在***性的工作中,Skog等人发现胶质母细胞瘤患者的血清外泌体含有特征性的突变mRNA(EGFRvIII mRNA)和miRNA,可用于提供诊断信息。这些核酸的发现导致了这样的假设,即EVs可以在细胞之间转移遗传信息。确实,瓦拉迪等人和Skog等表明,EV含有转移进入宿主细胞后仍然可以翻译的mRNA。EV中也有逆转座子和其他非编码RNA的表达。逆转录转座子序列和miRNA以及可翻译的mRNA都通过EV进行转移,这些成果突出了EVs作为遗传信息的载体和传播者的重要性。 虽然传统的光学显微镜的衍射极限接近EV的大小,但是不能产生清晰的图像。高分辨率EV图像需要通过电子显微镜(EM)或原子力显微镜(AFM)得到。这些方法的通量有限,因为需要专门的染色方案和设备。 (a)扫描电子显微镜(SEM)提供三维的表面拓扑信息。 (b)透射电子显微镜(TEM)具有出色的图像分辨率,可结合免疫金标记一起使用来提供分子表征。 (c)冷冻电镜(cryo-EM)无需大量处理即可分析EV形态。 动态光散射 (DLS),也称作 光子相关光谱 或 准弹性光散射 ,是一种物理表征手段,用来测量 溶液 或 悬浮液 中的 粒径分布 ,也可以用来测量如高分子浓溶液等复杂 流体 的行为。当光射到远小于其波长的小颗粒上时,光会向各方向散射( 瑞利散射 )。如果光源是 激光 ,在某一方向上,我们可以观察到散射光的强度随时间而波动,这是因为溶液中的微小颗粒在做 布朗运动 ,且每个发生散射的颗粒之间的距离一直随时间变化。来自不同颗粒的散射光因相位不同产生建设性或破坏性干涉。所得到的强度随时间波动的曲线带有引起散射的颗粒随时间移动的资讯。动态光散射实验易受灰尘或杂质影响,故样品的 过滤 和 离心 十分重要。动态光散射用于表征蛋白质、高分子、胶束、糖和纳米颗粒的尺寸。如果系统是单分散的,颗粒的平均有效直径可以求出来,这一测量取决于颗粒的心,表面结构,颗粒的浓度和介质中的***种类。DLS也可以用于稳定性研究,通过测量不同时间的粒径分布,可以展现颗粒随时间聚沉的趋势。随着微粒的聚沉,具有较大粒径的颗粒变多。同样,DLS也可以用来分析温度对稳定性的影响。动态光散射是收集溶液中做布朗运动的颗粒散射光强度起伏的变化,通过相关器将光强的波动转化为相关曲线,从而得到光强波动的速度,计算出粒子的扩散速度信息和粒子的粒径。 小颗粒样品的布朗运动速度快,光强波动较快,相关曲线衰减较快,大颗粒反之。 在外泌体研究中,动态光散射测量敏感度较高,测量下限为10纳米。相对于SEM技术来说,样品制备简单,只需要简单的过滤,测量速度较快。但是动态光散射技术由于是测量光强的波动数据,所以大颗粒的光强波动信号会掩盖较小颗粒的光强波动信号,所以动态光散射不适合大小不一的复杂外泌体样本的测量,只适合通过色谱法制备的大小均一的外泌体的尺寸测量,并且无法测量样品中外泌体的浓度。 纳米粒子跟踪分析(NTA) 是一种光学粒子跟踪方法,用于确定粒子的浓度和大小分布。用光束照射样品中的粒子。当粒子散射光并经历布朗运动时,摄像机记录下每个粒子的路径以确定平均速度和扩散率。与DLS的体散射测量不同,NTA跟踪单个粒子的散射。此信息将用于数学计算浓度(即视野中的粒子数量)和尺寸分布(即通过Strokes-Einstein方程的流体动力学直径,图5b)。 为了***定量异质囊泡的浓度和大小,NTA程序需要***优化摄像头和分析设置。 可能需要使用不同设置进行单独测量,以获取异质混合物中EV子集的***读数。 EVs在大小、起源和分子组成上都是异质性的;它们还存在于不同的复杂的生物流体中,包括血、胸腔积液、腹水、乳汁、唾液、脑脊液和尿液。这些流体中还含有大量的非囊泡大分子结构,可能会干扰EV的分析。所以EV的分离和富集显得尤为重要。 超速离心法(80%)和密度梯度离心法(20%)是较常见的两种高通量混合分离法。根据它们分离机制,这些方法可以分为三大类:密度、亲和和大小。 用不同的离心力将颗粒分离:以较低的离心力(300g)去除细胞碎片,而以较高的离心力(100000g)对EV进行沉淀和浓缩。尽管该方法是应用较广泛的金标准,但它也有许多缺点,如体积大、仪器昂贵、处理时间长、过程繁琐、被聚集的蛋白质和核蛋白颗粒污染以及需要大量的样品。 蔗糖梯度离心法是一种更为严格的超速离心法,它有助于进一步分离不同密度的囊泡,通常用于分离外泌体(悬浮密度为1.15至1.19 g/mL)。在这种方法中,一个包含不同大小囊泡和大分子的样品在一个密度从上到下递增的梯度表面上被分层。在离心过程中,不同的分子以不同的速率通过梯度沉积。由于其分辨率更高,该方法被认为可以分离更高纯度的EVs(特别是外泌体);它面临着许多与超速离心法相关的限制。更加新的等渗梯度(如碘黄醇梯度)法被认为成效更好。 基于聚合物共沉淀法的商业试剂盒(ExoQuick, Exo-Spin)已被开发用于EV富集。这些试剂采用降低EV的水合作用(从而降低溶解度)导致沉淀,然后在低离心力的情况下,沉淀的EV产物可以很容易地、重复性地分离出来,从而避免了长时间的超速离心法操作。这些试剂盒对于大规模使用来说是昂贵的,而且对于EV来说缺乏特异性。该方法还容易产生非均相聚合物颗粒。由于这些试剂均降低了EV和蛋白质的溶解度,因此该方法还可共沉淀脂蛋白和Ago-2 RNA复合物。共沉淀法作为EV分离方法受到了限制。 大小排阻色谱法根据它们的分子大小通过凝胶过滤来分离囊泡和其他分子。这种凝胶由含有特定大小分布孔隙的球形珠组成。当样品进入凝胶时,小分子扩散到孔隙中,而大分子则直接洗脱。大分子比小分子更早地离开色谱柱,这使得分子的停留时间与色谱柱的大小相关联成为可能。该分离方法已被应用于从复杂的生物媒介中分离纯化囊泡。Sepharose, GE Healthcare; qEV, iZon等商业公司也正在开发商业的产品以简化EV富集,这些产品的排除柱都大约是75纳米孔径的树脂。蛋白质和其他较小的污染分子被滞留在孔径中,而较大的囊泡(>75 nm)可以***通过并在空隙中被洗脱。大小排阻法可将EV与可溶性蛋白分离;为提高分离的效率和分辨率,需要考虑多种因素,包括介质类型、孔径、EV与介质之间的相互作用、柱的尺寸、柱的填充以及流速等。 为了提高复杂生物流体的EV分离效率和特异性,人们开发了多种新的EV富集方法。与传统方法相比,这些新方法中的大多数具有较低的吞吐率,应加以解决使之变得实用。 基于分子大小的分离是一种很有潜力的方法,可以将EV与大型细胞碎片分离开来。各种微流体过滤系统已经被开发出来,用于从大的细胞碎片和蛋白质聚集物中分离EV,这些系统大部分是基于分子大小差异。例如,Rho等人构建了一种微流控设备,该设备使用膜过滤器对未处理的***样本进行筛选,来分离EV。膜过滤器的大小1μm。在膜的下方插入一个毛细管,用于引导过滤后的EV进入收集通道。膜过滤器和毛细管导向器夹在两个环形磁铁之间;这种设置在进行大量的样品处理时可以方便地更换过滤器集。Lee等人较近使用声波以无接触方式对EV进行细分。这种分离利用超声波驻波,根据囊泡的大小和密度对其施加不同的声交互作用力。该装置由一对相互交错的换能器(IDT)电极组成,用以产生跨流动通道的驻波表面声波。EV蛋白主要来源于胞质膜、胞质醇,而非其他胞内细胞器(如高尔基体、内质网、细胞核等)。EV蛋白质的构成提示了囊泡的生物发生和cargo sorting(这个翻译有点怪)。因此***细胞外囊泡组织建议应该仔细鉴定EV蛋白,特别是跨膜蛋白和胞质蛋白。 在哺乳动物中,跨膜蛋白和脂质结合的细胞外蛋白(如内贴蛋白)都与微囊泡和外泌体有关。外泌体的跨膜蛋白富含四聚体蛋白(如CD9、CD63和CD81)一个具有四个跨膜结构域的蛋白质超家族。四聚体蛋白参与细胞膜的转运和生物合成的成熟,在外泌体中高表达,这一特性使得四聚体蛋白被用于外泌体的定量和表征。四聚体蛋白并不只在外泌体中仅有表达。另一方面,微囊泡富含整合素、选择素和CD40配体,表明它们来自于细胞的质膜,EV富含特异的跨膜蛋白受体(如表皮生长因子受体/ EGFRs)和黏附蛋白(如上皮细胞黏附分子/EpCAM)。由于许多跨膜蛋白参与了正常生理和疾病的发病机制,它们被用作重要的病理生理学EV生物标志物。 EV相关的囊内蛋白具有多种功能。它们包括具有膜或受体结合能力的参与囊泡运输的胞质蛋白,如TSG101、ALIX、annexin和Rabs。EV还富含细胞骨架蛋白(如:内酯、肌凝蛋白和小管蛋白)、分子伴侣蛋白(如:热休克蛋白/HSPs)、代谢酶(如:烯醇化酶、甘油醛3-磷酸脱氢酶/GAPDH和核糖体蛋白)。有趣的是,较近的研究发现EV蛋白可以被受体细胞有效地运输和接收,从而在体内和体外引起强烈的细胞反应。这带来了EV作为治疗和药物载体的新机遇。 EV蛋白的定量和特征鉴定不仅对阐明EV的生物发生和cargo sorting有重要意义,而且对鉴别生理和病理标志物也有重要意义。传统的蛋白质分析,包括Western blotting和酶联免疫吸附试验(ELISA),通常需要大样本量、大量处理和/或庞大的专门仪器,因而不太适合临床应用。 在EV蛋白评估时,Western blotting可能是较常用的技术,用于提示与EV相关的靶蛋白的存在。纯化的囊泡制剂(通常通过现行的梯度超离心法金标准制备)可以用含有变性剂和蛋白酶抑制剂的缓冲裂解液进行处理。然后用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分离蛋白裂解物,然后转移到膜上,对特定的蛋白target进行免疫印迹。虽然这种方法有很长的准备和处理时间(> 10h),但是Western blotting可以提供关于蛋白质分子大小的有用信息。不像Western blotting,ELISA只能在相对较小的范围内对目标蛋白进行定量,质谱分析可实现高通量肽谱分析。纯化的EV制剂经过酶消化和肽分离,然后用质谱仪电离分析。在这个复杂的过程中,多个步骤***影响EV蛋白组学分析。除了有效的EV纯化,质谱分析之前的肽分馏被认为是鉴定囊泡蛋白的一个重要前提。通常通过三种主要方法实现:(1)SDSPAGE,(2)二维液相色谱和(3)基于等电聚焦的分馏。既然质谱分析可以鉴定消化后的肽片段,那么适当的蛋白质鉴定、定量和验证是必要的。已经有两种用于定量的技术方法:基于标签的和无标签的。在基于标签的定量分析中,标签(等压或同位素)被用于比较分析。无标签的定量分析中,色谱强度的谱计数被应用。识别出的候选蛋白可以使用其他传统的蛋白质技术如Western blotting进行验证。在检测灵敏度方面,质谱法通常不如基于抗体的技术敏感。虽然质谱分析需要大量的准备和处理时间(数天),但它可以提供高通量、定量和EV比较蛋白质组分析。到目前为止,已有成千上万的囊泡蛋白被系统分类,蛋白质-蛋白质相互作用分析。基于质谱的哺乳动物和细菌EV的蛋白质组学分析的详细讨论已经在一些综述中被强调。这些网络和相互作用的研究有助于阐明EV载体的功能活动及其在细胞间远距离通信中的重要作用。 为了解决EV蛋白质定量相关的技术挑战,新一代生物传感器正在开发中。与传统的蛋白质检测方法相比,这些生物传感器利用独特的传感机制,可以检测各种大小和分子含量的EV。这些技术中的许多只需要更小的样本量和更少的样本处理过程,因此非常适合于医疗应用。 流式细胞术是一种基于光散射和荧光***来分选单个大颗粒(如细胞或微米大小的实体)的强大的技术,传统的流式细胞术对检测直径小于500 nm的小颗粒的灵敏度和分辨率有限。它还受到高光学背景的影响,由于鞘层流体中存在小颗粒(约200 nm)。用传统流式细胞术量化EV时,大量的小EV可能被忽略或者计数偏低:可能同时有多个小的囊泡被照亮被计数成一个单独的事件,这种现象被称为“群体理论”。为了解决传统流式细胞术的弊端,微米大小的乳胶珠被用来绑定多个囊泡。然后用荧光抗体对结合的EV进行染色,并对其蛋白标记物进行鉴定。这种方法缺乏分析单个囊泡的能力,并且不能区分不同的囊泡亚群,这可能会导致特征的丢失。该技术主要基于磁性纳米粒子(MNPs)。由于大多数生物物质天然缺乏铁磁背景,这种传感几乎不受同系统中其他生物样品的干扰。即使光学上浑浊的样品对磁场也是透明的;当靶分子被特定的MNPs***时,它们与自然的生物背景形成了强烈的对比。在基于核磁共振(NMR)的磁检测中,MNPs置于NMR磁场中,产生局部磁场,改变周围水分子的横向弛豫率,放大分析信号。核磁共振减少了样本处理过程,提高了检测灵敏度,已经被开发用于多个医疗点应用(直接从***样本中检测循环***细胞和细菌)。但是将这种技术运用在EV检测上却遇到了挑战,因为EV明显比***细胞小1到2个数量级。Shao等人开发了一种专门用于EV检测和蛋白质分析的新分析技术。此方法采用两步生物正交点击化学方法来标记EV,这种小分子(2.5k bp的DNA片段。这些片段代表整个基因组DNA,可用于鉴定亲代***细胞中存在的突变。虽然有可信的证据表明在EV中存在DNA,但其功能尚未确定。 EV核酸作为一种潜在的循环生物标志物和受体细胞间的调节因子已被广泛研究。传统的核酸提取和分析工具已经成功地为我们理解EV核酸奠定了重要的基础。由于EVs中核酸的含量较低,开发***的提取方法和灵敏的检测策略是非常重要的,特别是在小样本中对稀有目标分子进行检测。 随着人们对利用EV核酸作为微创诊断标记的兴趣日益浓厚,新的生物传感器技术已被开发出来,使提取和分析变得更加***、快速。这些新平台中有许多提供了对目标核酸标记的敏感定量,并且能够在复杂的生物学背景下识别疾病标记,甚至包括单核苷酸点突变。这为个性化临床医疗开辟了许多新的机会。 虽然传统PCR是检测基因/转录突变的强大技术(EGFRvIII缺失突变),但其敏感性有限,其在检测单核苷酸突变方面存在很多不足。这个问题与EVs特别相关,因为在野生型转录本的大背景中,突变转录本的比例很低。Chen等人较近采用了一种液滴数字PCR (ddPCR)技术来检测EV中的罕见突变。Shao等人较近开发了一种综合微流控平台,用于现场EV核酸分析,该平台集成了三个功能模块:***富集EVs,芯片上RNA分离,实时RNA分析。这个平台被称为免疫磁性外泌体RNA(iMER)分析平台:利用抗体功能化的磁珠从宿主来源的囊泡中分离***特异性EVs,然后在芯片上裂解免疫磁珠吸附的囊泡。当EV裂解液通过玻璃珠过滤器时,选择性吸附EV RNA并从过滤器中洗脱,用于反转录和qPCR分析。为了简化分析过程,所有关键部件都集成到一个芯片盒中。随着该系统的发展,作者研究了核蛋白的两个mRNA靶标,MGMT(6-甲基鸟嘌呤)***是一种复杂的结构,包括恶性细胞和周围的基质细胞,如内皮细胞、成纤维细胞和免疫细胞。较近的研究表明,EVs在***微环境中促进细胞间通讯,从而调节疾病的发生、发展,并且在治疗反应方面发挥重要作用。 这一大块儿的其他内容大家感兴趣的话可以阅读原文献。 在大多数神经退行性疾病(如阿尔茨海默病、帕金森病、额颞叶痴呆)中存在类似的疾病进展模型,其中错误折叠的蛋白质自结合形成有序的聚合体并在细胞中聚集。阿尔茨海默病(AD)中,淀粉样蛋白的Abeta肽的形成可能是这些蛋白聚合体中较***的。帕金森疾病(PD)中,另一种类型的聚合体在细胞内形成,主要由alpha-synuclein(突触核蛋白)组成,称为路易小体。较近的研究表明,许多神经退行性疾病中涉及的错误折叠蛋白出现在EV中。这些囊泡为检测和监测神经退行性疾病带来了新的希望。AD是一种迟发性神经系统疾病:由于神经变性而导致记忆和认知能力的逐渐丧失。虽然AD的确切病因仍是一个有争议的话题,但很明显,与Aβ肽相关的斑块沉积和与tau蛋白相关的神经纤维缠结对疾病的进展是非常重要的。这些淀粉样肽来源于淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白水解过程。这一
如果有人问你:什么时候你才会开始意识到自己正在老去?或许你会说看到自己脸上有出现皱纹时候才会意识到。其实现在很多00后都开始自嘲自己是“老阿姨”了,在前段时间的“95后的初老症状”也同样引起了***的一番热议。在2020年的时候新氧联合***财经就发布过一篇《新青年抗衰老调查报告》,报告中指出:20岁以前有衰老焦虑的人是不到7%,但进入20岁到0岁这一年龄段就暴增至59.2%。外泌体
不知道你有没有这样的经历,就是涂了非常多的粉底液却总是盖不住脸上的疲惫感?抹了再多的遮瑕也挡不住乌青的眼圈?而且用再多的高光和提亮等也藏不住深深的泪沟?其实小编说句心里话,现在的各种化妆产品往往只能起到锦上添花成效,就算你可以把脸上的小痘印、小雀斑遮挡住,但是皱纹和松弛的皮肤状态却是很难遮挡得住的,今天小编就给女神们推荐一个抗衰神器-外泌体。首先外泌体是什么?
外泌体无疑是眼下生物科学领域较炙手可热的研究对象,它仅仅在几十年时间里就就在“囊泡运输”研究领域拿下了4次的诺贝尔生理学或医学奖,可以说得上是名副其实的“诺奖实力派”,在2013年的时候诺贝尔就授予美国科学家詹姆斯·罗思曼、兰迪·谢克曼和德国科学家托马斯·祖德霍夫生理医学奖,以此来表彰他们发现细胞的囊泡运输调控机制。外泌体
其实外泌体就好像是一位快递员,它主要是负责细胞之间的物质运输和信息传递,它从细胞阶段抗衰,传递运输营养或某种活性物质,发送抑制信号让炎症因子“闭麦”;其中发送促进信号可以加快***和胶原合成等让皮肤健康焕新。严格意义上来讲外秘体就是细胞的囊泡,它可以分泌出很多种细胞因子和大量的胶原因子,通常它的直径会在30-100纳米,简单来讲就是头发的千分之一,它可以自由的进入细胞的间隙(从表皮到真皮),外泌体作为细胞美容的升级版,它不仅克服了细胞的局限性,而且又可以设定明显的***性,为皮肤组织修复与改善开辟了新角度。外泌体对我们皮肤有什么用?
我们都知道所有的皮肤问题较终都会归结到细胞上,就拿皮肤的细胞来说:如果一个人的皮肤细胞出现了问题,那么会很容易出现这几种情况,炎症问题会使细胞间的通讯中断,接着导致皮肤的自我调节功能没有办法进行正常工作;还有就是细胞受损使得细胞的新陈代谢出现问题,如果细胞生命周期变短了,那么细胞分裂更新速度变得非常缓慢,然后随着人的年龄增长胞也会慢慢的“集体衰老”,而衰老细胞会逐渐的累积起来,进而出现肌肤暗黄干燥、长皱纹等问题。外泌体对我们皮肤有什么用?
能够直接调控细胞的外泌体就无疑是像拿到了影响细胞的关键钥匙,它会像一个小精灵一样利用细胞记忆去智能调控肌肤修复方向,并且***自体***力和加强新陈代谢能力。为什么抗衰需要外泌体
我们来举个例子:像一些皮肤比较薄的人是很容易出现干燥、敏感等问题,这主要是因为皮肤层次太薄、细胞缺失、胶原蛋白层缺失等问题导致的,而整个皮肤衰老的原因一般都会归于基因变异、细胞衰老、细胞损伤增加和端粒异常等因素。为什么抗衰需要外泌体
而外泌体是有多种的细胞因子组成的细胞结构,它主要是修复细胞层面的再生,接着由新生的细胞重组你衰老的细胞,然后***细胞能量。话句话说就是我们皮肤出现问题,在很多时候是根源性皮肤细胞因子排序错乱或缺失、衰老即萎缩等所导致的,那么它就需要完整的细胞因子帮助修复你受损等的细胞,而光泽、水嫩、代谢加速实际上都是因为新生细胞重焕活了新生肌肤,然后让皮肤就会走向年轻化趋势。
外泌体(Exosomes)是一种双磷脂膜囊泡,含有蛋白、脂质及核酸等多种成分,是细胞外囊泡的一种。外泌体体积小,直径在40~200 nm,在透射电镜下具有典型的杯状结构。几乎所有的细胞都分泌外泌体,外泌体在细胞间的连接中发挥重要作用。
01、外泌体的形成
细胞发生内吞后,内陷的细胞膜形成数个小囊泡,小囊泡相互融合形成了早期内体(early endosome),逐渐成熟的早期内体膜多处凹陷并向内出芽形成含管腔状囊泡(intraluminal vesicle,ILVs)的晚期内体(late endosome);富含ILVs的内体称为多囊体(multivesicular body,MVBs)。MVBs有两个去向:一部分MVBs与溶酶体融合,以降解其内容物;另一部分MVBs与细胞膜融合,释放ILVs到细胞外,这些分泌的ILVs即为外泌体。
02、外泌体的功能
外泌体是一种细胞连接物,能够输送蛋白、脂质及核酸到靶细胞,可以在血管形成、抗原呈递、炎症反应和***及分化等各种生物过程中发挥功能。
外泌体可以通过两种途径影响受体细胞,其一,外泌体和受体细胞间的配体-受体相互作用,无需将外泌体或其内容物内化到靶细胞。其二,外泌体通过膜融合或内吞作用进入细胞,其成分被摄取后释放到细胞质中,通过调节特定的***和信号通路影响宿主细胞,较终导致细胞功能或表型的改变。
外泌体提取方法取决于研究的具体目的、来源样本种类以及研究者的实验能力和经验。下面是一些常用的外泌体提取方法及其适用性分析,供参考:
1、差速离心法(Differential centrifugation method)。
原理:利用不同离心速度将细胞碎片和大颗粒物质逐步沉淀,较终分离出直径在30-150 nm之间的外泌体。
优点:简单易行,无需特殊设备。
缺点:提取效率不高,需要多次离心以去除杂质。
适用性:适用于从体液(如血浆、尿液等)中提取外泌体。
2、密度梯度离心法(Density gradient centrifugation)。
原理:通过在密度梯度(如葡萄糖、蔗糖等)上进行离心,使外泌体在不同密度层分离。
优点:提取纯度较高,可分离出不同密度的外泌体亚群。
缺点:操作相对复杂,需要较长的离心时间。
适用性:适用于从细胞培养液或血清等样本中提取外泌体。
3、尺寸排除色谱法(Size exclusion chromatography)。
原理:利用尺寸排除色谱柱分离样品中的分子,将外泌体从大分子组分中分离。
优点:提取纯度较高,可同时分离不同大小的外泌体。
缺点:需要特殊的设备,操作复杂。
适用性:适用于从细胞培养液或血清等样本中提取外泌体。
4、外泌体富集试剂盒(ExoQuick)。
原理:利用一种特殊的聚合物材料,将外泌体富集到一个小体积中。
优点:操作简单快捷,可在不加离心的情况下从体液中提取外泌体。
缺点:提取效率相对较低。
适用性:适用于从体液(如血浆、尿液等)中快速富集外泌体。
选择哪种外泌体提取方法应该结合实验需求和样本特点来确定,以获得较优的结果。